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慢病毒介导的GFP.shRNA在小鼠新生血管模型中转染效率的研究         ★★★
慢病毒介导的GFP.shRNA在小鼠新生血管模型中转染效率的研究
作者:王宏彬 文章来源:首都医科大学附属北京友谊医院眼科 点击数:528 更新时间:2011/9/13 11:58:00

目的  探讨慢病毒介导的shRNA在小鼠脉络膜新生血管模型中对于不同组织的转染效率,为进一步的基因治疗有效性提供依据。
方法  利用pLenti-V5-H1-GFP.shRNA ,pCMV- R8.2 , pLP/VSVG 共转染293FT细胞,提取上清液,获取高浓度的lenti-GFP.shRNA. 制作激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型,激光后1小时行玻璃体腔注射1ul慢病毒介导的GFP.shRNA。在一周时处死小鼠,行眼球冰冻切片,在荧光纤维镜下观察组织和细胞对于GFP基因的的转染效率,转染了GFP基因的细胞和组织将呈现绿色荧光。
结果  未行激光治疗的眼,玻璃体腔注射则眼组织不会转染GFP基因,视网膜下注射,则仅在注射部位可见色素上皮层转染。在激光治疗的视网膜激光斑附近,玻璃体腔和视网膜下注射均可见包括血管内皮细胞在内的视网膜,脉络膜全层对于绿色荧光基因的转染。
结论  在激光诱导的脉络膜新生血管模型中,利用慢病毒载体可以有效将目的基因转染到视网膜,脉络膜组织中,为进一步的治疗提供可行性。

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