目的
本实验旨在观察辛伐他汀对体外培养牛视网膜色素上皮细胞增生作用的影响,探讨一种新的玻璃体视网膜增生性疾病的药物治疗方法。
材料和方法
取健康无眼疾的小牛眼球,无菌条件下,沿角巩膜缘后5mm处环形剪开眼球壁,弃去眼前段和玻璃体,分离视网膜神经层,暴露RPE层,消化液消化,吹打、收集细胞悬液,终止消化,离心,弃上清液,加入含血清的DMEM培养液,制成细胞悬液,接种于培养瓶中,置培养箱中培养;每3~5天换液,至细胞融合传代。行免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。
选第3~6代细胞用于实验,实验分实验组和对照组,对照组加含10%胎牛血清的DMEM培养液,实验组根据加入辛伐他汀浓度的不同分为4组(浓度分别为1μmol/L, 5μmol/L, 10μmol/L, 50μmol/L),分别培养24h、48h、72h,加入MTT, 孵育4小时后,加入DMSO,震荡均匀,在酶联免疫检测仪490nm处测A值。
结果
原代培养的RPE细胞呈扁平不规则形,可见透明细胞核,胞浆内富含黑色素颗粒。传代细胞呈梭形及不规则形。角蛋白免疫化学染色胞浆呈特异性棕黄色。MTT法测得各组吸光度A值显示,细胞增生抑制率随浓度增加和时间延长而升高。在一定浓度范围内,药物的抑制作用有浓度-时间依赖关系。
结论
辛伐他汀能够抑制体外培养的牛视网膜色素上皮细胞增生,且呈剂量依赖性,可能为药物防治增生性玻璃体视网膜病变提供新方法。
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