| 目的 利用全反式视黄醛和乙醇胺体外合成脂褐质荧光基团A2E，观察A2E的特性以及RPE细胞对A2E的摄取；研究A2E介导的蓝光对RPE细胞的损伤；比较蓝光滤过型人工晶状体（IOL）和其它紫外线滤过型IOL对体外培养的含A2E的RPE细胞光损伤的保护作用。
方法
1．全反式视黄醛和乙醇胺混合反应生成A2E，HPLC纯化的A2E甲醇溶液（≈40µM）暴露于室温、室内光线下，用RP-HPLC分析A2E异构化程度；在体外培养的RPE细胞中加入A2E，使RPE细胞摄取A2E。
2．体外培养的第六代RPE细胞中加入相当于体内不同浓度的A2E（25、50、75、100µmol/l），分别接受蓝光和绿光照射20min，再分别继续培养12、18和24小时，观察细胞活力、细胞荧光染色形态，流式细胞仪检测细胞凋亡率。
3．体外培养第六代RPE细胞，加入25µmol/l A2E，分别接受蓝光、绿光和白光照射20min，在光照通路上分别放置蓝光滤过型IOL或紫外线滤过型IOL或不放置IOL。
结果
1．100mg全反式视黄醛和9.5mg乙醇胺在体外合成53.8mg A2E（76.3µmol，49％）。在室温、室内光线下A2E发生异构化，形成A2E：iso-A2E＝4：1的平衡状态。A2E被RPE细胞摄取后主要分布于细胞核周围，具有自发荧光。
2．位于蓝光照射区内的含A2E的RPE细胞死亡，而位于蓝光照射区外的仍存活；光照前细胞培养液中加入的A2E浓度越高，细胞死亡数目越多。RPE细胞死亡是通过凋亡机制。绿光照射后的细胞死亡数目较蓝光照射后明显减少。
3．蓝光滤过型IOL明显降低暴露于蓝、绿和白光的含A2E RPE细胞的死亡。而紫外线滤过型IOL对含A2E的RPE细胞保护作用较小。
结 论
利用全反式视黄醛和乙醇胺能在体外快速高效合成A2E；蓝光照射能导致RPE细胞凋亡，而A2E是蓝光损伤的诱导剂。蓝光滤过型IOL能够滤过蓝光，降低蓝光对含有A2E的RPE细胞的光化学损伤。 |
