目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor ,EGF)对体外正常和氧化损伤培养条件下的人眼Müller细胞增殖迁移的影响及其作用机制。
方法 对培养的人眼Müller细胞系MIO-M1细胞采用BrdU标记法和Transwell小室、划痕实验观察正常及过氧化氢(H2O2)氧化损伤条件下0 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml和100 ng/ml EGF作用24h、48h和72h后对Müller细胞增殖、迁移的影响;采用MTT比色法观察加入PI3K/PDK1/PKB(Akt)信号传导通路阻断剂LY294002后Müller细胞增殖迁移的变化;通过Western blotting技术检测体外不同条件培养下EGF对ERK1/2及Akt信号传导通路的作用。
结果 正常培养条件下,EGF促进Müller细胞增殖的作用呈浓度依赖性,100ng/ml EGF促进Müller细胞增殖作用最强,为对照组的1.6倍;10ng/ml EGF促进Müller细胞迁移作用最强。氧化损伤状态下,0.08 mmol/l H2O2作用Müller细胞24h后导致其半数致死且Akt信号通路激活,提前2h加入外源性EGF后,发现100ng/ml EGF对抗氧化所致Müller细胞的损伤作用最明显;同时提前2h加入Akt信号通路阻断剂LY294002后,Akt信号传导通路的保护作用被阻断减弱。
结论 EGF 对体外培养的Müller细胞具有促进增殖及迁移的作用;加入外源性EGF后,EGF通过Akt信号传导通路对H2O2损伤的Müller细胞发挥保护作用。 |