目的 探讨脱细胞异种角膜基质的生物相容性,评价组织工程化角膜上皮组织作为板层角膜移植供体的可行性,观察脱细胞角膜基质的细胞化情况和种子细胞的存活情况。 方法 采用Dispase-Triton-X-100处理猪角膜基质,将脱细胞猪角膜基质植入兔角膜基质囊袋,术后观察排斥反应情况,以新鲜猪角膜基质为对照。以组织工程化雄性角膜上皮组织为供体,同种雌性为受体,作板层角膜移植,观察角膜的混浊、水肿、新生血管等情况,确定排斥反应发生情况。检测组织结构和脱细胞猪角膜基质的细胞化情况,Y染色体性别决定基因 (SRY)-PCR追踪种子细胞的存活情况。 结果 猪角膜基质植入兔角膜囊袋后,角膜逐渐恢复透明,RI<6,组织病理学观察角膜结构完整,胶原纤维平行排列,A组少许细胞长入脱细胞角膜基质边缘,各组免疫组化检测未见CD4+、CD8+T淋巴细胞浸润。组织工程化角膜上皮作异体板层角膜移植后,3-4d上皮光滑,10-20d变为透明,15d时角膜上皮、基质、内皮完整,上皮细胞约4-5层结构,少许基质细胞长入支架,1月时可见角膜上皮细胞约7-8层细胞,基质纤维排列规则,多量细胞长入脱细胞角膜基质。上皮细胞表达CK3,支架内细胞表达波形蛋白,与植床内角膜基质细胞性质相同。SRY-PCR结果显示种子细胞可以在受体内长期存活。 结论 脱细胞猪角膜基质生物相容性良好,组织工程化角膜上皮可作为板层角膜移植的供体,脱细胞猪角膜基质细胞化良好,种子细胞可以在受体内长期存活。
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