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缝隙连接蛋白50真核表达载体的构建与表达
作者:林英,郑…  文章来源:150001 中国黑龙江省哈尔滨市,哈尔滨医科大学附属第一临床医学院附属眼科医院  点击数1005  更新时间:2007/5/30 11:03:58  文章录入:hljyinglin  责任编辑:毛进
目的:构建pEGFP/缝隙连接蛋白(connexin ,Cx) 50 真核表达载体,观察其在细胞内的表达和功能情况,为进一步研究Cx50在维持晶状体透明性中的作用。  方法:根据Cx50基因序列设计PCR引物,在5′端和3′端分别添加EcoR I和KpnI 酶切位点,将PCR片段插入至有增强绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点上,构建Cx50基因真核表达载体,并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定。再经脂质体转染至宫颈癌Hela 细胞中,通过荧光显微镜检测蛋白表达。  结果:PCR、酶切法和DNA测序鉴定证实构建的质粒中含有Cx50基因。转染细胞有增强绿色荧光蛋白及Cx50的表达。 结论:成功的构建了人缝隙连接蛋白Cx50基因的真核表达载体。融合表达增强绿色荧光蛋白后,不影响缝隙连接蛋白的功能,在缝隙连接蛋白的研究中,pEGFP-N1载体可以作为一个优选载体。
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