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| Brown Norway大鼠视网膜色素上皮细胞Endostatin转基因体外培养表达研究 |
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作者：尚庆丽 马… 文章来源：河北医科大学第二医院眼科 050000 点击数： 更新时间：2004-6-29 
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| 目的 应用转基因技术体外培养稳定表达人Endostatin的视网膜色素上皮细胞（RPE），为脉络膜。方法 采用人Endostatin真核表达载体pSecTagA-hEndostatin，应用电转移法转染BN大鼠RPE细胞，以Zeocin筛选出表达Endostatin的RPE细胞，传代培养3周。观察指标；1.转染后提取RPE细胞总DNA进行PCR，产物行琼脂糖；2.原位杂交、western bloting 和兔免疫组化，分别在转录和翻译水平观察Endostatin在转染RPE细胞中的表达情况；3.ELISA法检测转染RPE细胞培养上清中Endostatin的表达水平；4.MTT测定所表达Endostatin蛋白活性。结果 PCR检测结果表明转染后的RPE细胞总DNA中存在长度为550bp左右的特异性条带；原位杂交，免疫组化观察到大量RPE细胞表达Endostatin mRNA及Endostatin蛋白；western bloting 显示，RPE细胞培养上清中有Endostatin阳性条带；ELISA法检测到转染后3、5、7、10、14、20天6个时间培养上清Endostatin蛋白表达量分别为321.5±41.0ng/ml，162.5±23.4ng/ml，78±11.22ng/ml，78±9.87ng/ml，78±10.06ng/ml，78±12.67ng/ml；MTT显示，培养上清中Endostatin能够抑制ECV304的增殖，IC50为45.68ug/ml，对RPE细胞、K562的生长影响；结论 经电转移法获得体外稳定表达Endostatin的RPE细胞是可行的，转染成功的RPE细胞能够稳定表达Endostatin蛋白，所表达的Endostatin蛋白具有生物活性。
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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