目的 通过慢病毒介导bcl-2shRNA表达载体质粒转染HLECs，观察bcl-2基因表达的情况及对HLECs细胞凋亡的影响。
方法 构建bcl-2shRNA慢病毒表达载体质粒，转染人永生性HLECs系SRA01/04，设阴性对照组，脂质体对照组，空白对照组。48h后流式细胞仪检测转染效率，免疫印迹法检测bcl-2蛋白的表达,荧光定量PCR检测bcl-2 mRNA表达，Annexin V-FITC/PI双染法检测HLECs的细胞凋亡情况。
结果 转染48h后,流式细胞仪检测转染率，慢病毒组为83.5±1.5%，脂质体组为44.1±1.8%，差异具有统计学差异（p<0.05）。免疫印迹法和荧光定量PCR表明，慢病毒组可抑制bcl-2蛋白和mRNA的表达。Annexin V-FITC/PI双染法检测得慢病毒组凋亡率为64.7±1.2%,与脂质体对照组(39.2±1.8%)比较差异有统计学意义(p<0.05）。
结论 慢病毒可有效介导bcl-2 shRNA转染HLECs，转染率高于脂质体。转染后，bcl-2基因表达受抑制，HLECs的细胞凋亡增加。 |
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